Анализ на вирус гепатита С методом ПЦР. Диагностика гепатита с пцр


Анализ крови методом ПЦР на гепатит С: показания, эффективность диагностики

ПЦР (полимеразная цепная реакция) на гепатит С - это анализ, выявляющий антитела к возбудителю. Данное исследование настолько сложно, что стоит сначала поговорить о самом заболевании, чтобы понять суть анализа. В настоящее время во всем мире этому опасному заболеванию подвержено большое количество людей. И это только те люди, которые больны гепатитом С, а ведь существуют и другие разновидности патологии.

Изображение 1

Зачем нужна ПЦР-диагностика?

Как известно, немалая часть успеха в лечении любого заболевания принадлежит правильной диагностике. Еще в 1983 году Кэри Муллис совершил прорыв в медицине, открыв полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Именно благодаря этому анализу возможно точно выяснить, какая инфекция вызвала заболевание. Например, в случае с гепатитом можно точно назвать возбудителя болезни, подобрать правильное лечение.

Иллюстрация 2

До изобретения полимеразной цепной реакции (ПЦР) ученые могли единственным способом получить генетический материал: вырастить живое существо, которое бы содержало нужный ген. ПЦР-диагностика дает возможность вырастить такой ген без участия всего организма.

Кроме того, анализ ПЦР предоставляет такую возможность, как подбор нужного лекарства для устранения инфекции. Это очень важно при гепатите, поскольку любое неподходящее лекарство с удвоенной силой действует на печень. ПЦР позволяет выявить искомый ген за несколько часов, используя специальную аппаратуру.

Изучение этого вируса началось сравнительно недавно - лишь в 1989 году гепатит С был выделен в определенную группу и отделился от форм А и В. Вирус С имеет 40 разновидностей и способен менять свою генетическую структуру. В этом его особенность и коварство. Размножаясь в организме человека, вирусы хорошо приспосабливаются и вырабатывают антитела, которые способны противостоять многим медикаментам.

Иллюстрация 3Гены вируса представляют собой РНК, которые заключены в оболочку. Заражение происходит чаще всего через кровь. В засохшей крови вирус может находиться в живом состоянии от нескольких часов до нескольких дней. Попав в организм, он с током крови достигает печени и уже в ее клетках начинает размножаться, повреждая их.

Выработанные организмом лимфоциты для борьбы с вирусом тоже губительно действуют на печень. Поэтому очень важно провести своевременную и качественную диагностику. Биохимический анализ на гепатит С позволяет выявить болезнь и обнаружить природу ее появления.

Полимеразная цепная реакция на гепатит С

Анализ полимеразной цепной реакции ПЦР делается всем людям, у которых были обнаружены антитела к этой болезни. В результатах указывается запись «обнаружен» или «не обнаружен».

Особенностью анализа ПЦР является то, что вирус можно обнаружить, даже если в крови пациента содержится минимальное количество вирусных элементов. Другой важной особенностью данного исследования является то, что он дает количественный показатель содержания вируса в крови.

Изображение 4

Если была выявлена отрицательная ПЦР, считается, что в данный период вирус может быть в спящем состоянии. Диагностика гепатита С с помощью ПЦР дает большую вероятность достоверности показателей. Это позволяет выявить инфекцию на ранних сроках заболевания, когда в крови еще не выработались антитела.

ПЦР условно делится на два вида: качественная и количественная. При качественном исследовании в крови пациента выявляется РНК HCV. Количественный же анализ направлен на измерение уровня РНК HCV в биологическом материале.

Благодаря этому врачи могут наблюдать активность размножения вирусов в организме больного (вирусная нагрузка). После того как начата противогепатитная терапия, анализ ПЦР проводится регулярно, с определенной периодичностью, чтобы выявить динамику болезни.

https://www.youtube.com/watch?v=CJqdhbEkZw0

Это делается в следующих целях:

  1. Для выявления эффективности проводимого лечения.
  2. Для определения точных дозировок лекарственных препаратов.
  3. Для установления сроков приема медикаментов.
  4. Для подбора нужных антивирусных средств.

Помимо этого, эффективность терапии определяется по биохимическому анализу крови. Основу лечения составляет пегилированный или простой альфа-интерферон вместе с рибавирином. Пройдя вовремя анализ ПЦР на гепатит С, вы сможете выявить болезнь, что в значительной степени определит успех дальнейшего лечения.

Как передается заболевание?

В быту гепатит практически не передается, только в крайних случаях, например, после повреждения кожных покровов при использовании общей бритвы, ножниц больного человека. При попадании крови инфицированного человека на рану здорового вероятность заразиться велика. При половом контакте также имеется риск заражения, но он минимален.

Иллюстрация 5

Большая вероятность подхватить вирус есть в медицинских учреждениях, косметологических кабинетах, там, где нарушаются нормы гигиены. Но если инъекции, стоматологические услуги, косметические процедуры, переливание крови производятся одноразовыми инструментами с использованием гигиенических перчаток, то риск заразиться любым из видов гепатита сводится к нулю.

Заболевание может передаться и от инфицированной матери к ребенку в момент родов. В зону риска попадает и медицинский персонал. Поэтому существует ряд работников, которым следует регулярно проходить анализы на обнаружение вируса гепатита С, придется сдавать их систематически, чтобы подтвердить или опровергнуть наличие болезни.

Гепатит С - это опасное заболевание, долго протекающее без каких бы то ни было симптомов; если вовремя его не обнаружить, то оно переходит в стадию цирроза, который вылечить невозможно.

Подготовка и процедура сдачи биоматериала

Подготовительные процедуры для проведения этого анализа не нужны. Все, что касается индивидуальных случаев, заранее обсуждается с лечащим врачом.

Иллюстрация 6

Процедура прохождения исследования включает в себя следующие действия:

  1. Накладывается жгут на предплечье, чтобы на время остановить циркуляцию крови. Это нужно для обнаружения вены на руке, которая начинает активно проступать сквозь кожу.
  2. Место введения иглы протирается спиртом.
  3. Игла вводится в вену.
  4. К игле крепится трубка, куда поступает кровь из вены.
  5. После забора нужного количества крови игла вынимается.
  6. К месту укола прикладывается марлевый или ватный тампон.
  7. Место укола прижимается согнутой рукой.

Следует иметь в виду следующее:

  1. В настоящий момент вакцины для профилактики гепатита С не существует.
  2. После заражения антитела формируются на протяжении недели и более, поэтому на ранних этапах заболевания анализы на вирус С могут дать ложный результат. Важно провести несколько исследований в случае подозрения на инфекцию.
  3. Все доноры крови и органов проходят в обязательном порядке анализы на наличие гепатита С.
  4. При подозрении на инфицирование, возможно, понадобятся и другие анализы для выяснения того, насколько поражена печень. Может быть произведена проверка на билирубин, щелочную фосфатазу, аланинаминотрансферазу и аспартатаминотрансферазу.
  5. Медицинские учреждения в обязательном порядке предоставляют сводки о заражении некоторыми видами вирусов. При обнаружении вспышки гепатита С в регионе местные здравоохранительные органы должны оповестить через СМИ всех жителей, находящихся в группе риска.

При подозрении на болезнь в первую очередь нужно провести качественный анализ, который даст достоверные результаты.

zpppstop.ru

Точное определение РНК вируса гепатита С методом ПЦР

Бороться с ВГС крайне сложно – благодаря способности к мутации возбудитель недуга избегает иммунного ответа организма. Кроме того, диагностика гепатита С затруднена отсутствием симптомов – у носителей вируса часто нет видимых причин для обращения к гепатологу и прохождения ПЦР. ВГС имеет 6 генотипов и множество субтипов, их правильное определение является обязательным условием успешного лечения. Чтобы предотвратить трансформацию гепатита С в хроническую форму и получить шанс на восстановление работы печени, следует записаться на прием к врачу, обнаружив хотя бы один из признаков недуга. Наиболее распространены следующие симптомы: быстрая утомляемость, отсутствие аппетита, пожелтение кожи, боль в правом боку.

Что показывает ПЦР анализ

Для диагностики гепатита С часто используется анализ ПЦР – полимеразная цепная реакция. Данный метод позволяет увеличить концентрацию в пробе (биологическом материале) некоторых фрагментов ДНК. Благодаря эффективности и высокой точности анализ широко применяется в медицинской практике – с его помощью диагностируются наследственные и инфекционные заболевания. Суть анализа крови методом полимеразной цепной реакции заключается в многократном копировании определенного фрагмента ДНК. Выбранный участок должен удовлетворять заданным требованиям.

ПЦР диагностика при гепатите С

Методики диагностики гепатитаПолимеразная цепная реакция помогает гепатологу поставить окончательный диагноз. С помощью метода можно определить, есть ли в исследуемом материале HBV. Качественный метод позволяет подтвердить факт заражения и установить патогенез заболевания. Количественный анализ ПЦР дает информацию о том, насколько интенсивно развивается гепатит С. На основании полученных в результате диагностики данных врач назначает пациенту наиболее эффективный курс терапии.

Для нахождения в крови ВГС сегодня применяются специальные тест-системы. Метод ПЦР назначается, если:

  • результаты серологических исследований сомнительны;
  • нужно определить генотип вирусного гепатита С;
  • необходимо проконтролировать результативность противовирусного лечения.

Анализ осуществляется следующим образом: генетический материал (кровь) помещается в пробирку, к нему добавляются праймеры, ДНК-матрица, буферный раствор. Затем смесь нагревается до 95°С и охлаждается. После удаления из раствора остатков нуклеотидов специалист может определить, есть ли в исследуемом образце искомый ген. Если при диагностике методом ПЦР в крови пациента выявляется вирус гепатита С, врач определяет стадию заболевания и назначает курс лечения.

Анализ ПЦР РНК (качественный)

В результате качественного анализа может быть установлен только факт наличия вируса гепатита С в крови. Прохождение данного теста назначается всем, у кого выявлены антитела к ВГС. Результат исследования однозначен, возможны две формулировки: «обнаружено» и «не обнаружено». Первый вариант свидетельствует о том, что человек инфицирован, гепатит С прогрессирует и поражает новые клетки печени. Результат «не обнаружено» подтверждает отсутствие в крови ВГС. Наличие вируса в организме может быть выявлено качественным методом полимеразной цепной реакции только через одну-две недели после инфицирования.

Анализ ПЦР РНК (количественный)

Концентрацию вируса гепатита С (виремию) позволяет с высокой точностью установить количественный анализ ПЦР. Определив вирусную нагрузку (количество РНК), можно выбрать оптимальный способ лечения. Чем ниже уровень концентрации вируса, тем больше шансов на полное выздоровление. Количественный анализ используется не только во время начальной диагностики, но и в течение терапии. С его помощью можно контролировать успешность лечения и прогнозировать дальнейшее развитие болезни. Если прием медикаментов не приносит пользы, то количественное исследование укажет на отсутствие изменений. Такой результат должен стать основанием для внесения корректив в лечение.

Достоинства метода

Диагностика заболеваний печениДиагностический метод ПЦР имеет множество преимуществ, среди которых следует выделить чувствительность и точность. Анализ позволяет получить максимум информации о том, как ведет себя в организме больного РНК-вирус. Результаты исследования являются основой для подтверждения диагноза, если последний по какой-либо причине вызывает сомнения. Еще одно достоинство полимеразной цепной реакции заключается в возможности использовать для анализа различный биологический материал – не только кровь, но и мочу, слюну и другие выделения. Количественные и качественные исследования выполняются максимально быстро, что позволяет пациенту не томиться в ожидании результатов, а как можно раньше начать лечение.С помощью ПЦР можно определить, какова на данный момент активность вируса гепатита С и чем она угрожает больному. Если гепатолог назначил пациенту эффективную терапию, полимеразная цепная реакция покажет, что ВГС прекращает заражать новые клетки. Как правило, к такому результату приводит прием качественных медикаментов – например, индийских дженериков.

india-expres.com

что это такое, положительный, расшифровка, отрицательный

Гепатит С — воспаление клеток печени, возникающее вследствие инфицирования вирусом HCV (гепатита С) посредством контакта с кровью зараженного человека. Генетический код флавивируса HCV несет молекула РНК (рибонуклениновой кислоты), содержащаяся в структуре вируса. Это опасное для жизни пациента явление отличает скрытность на начальной стадии патологии. Временной интервал между инфицированием и появлением симптомов (реагирования иммунной системы) может составлять от одного месяца до полугода. Как правило, болезнь принимает хроническую форму и трудно поддается излечению.

Современная медицина позволяет диагностировать патологию при незначительном поражении печени. К самым распространенным и эффективным методам диагностики относится анализ ПЦР. Рассмотрим в данной статье, что это такое и какие его разновидности существуют.

Что представляет собой исследование

Анализ ПЦР на гепатит С — обследование в условиях лаборатории, выявляющее флавирус – генетический материал вируса рибонуклениновой кислоты (РНК). Оно определяет количество молекул РНК в крови, качество биологического материала, генетический тип флавируса HCV.

Загрузка образцов крови в центрифугу

Метод ПЦР при гепатите С позволяет обнаружить минимальное количество флавируса еще до формирования антител, как правило, вскоре после инфицирования.

Исследование часто именуют РНК-анализ, так как он выявляет частицы рибонуклеиновой кислоты, имеющие размер 30-60 нм, содержащиеся в флававирусе.

Исследование проводится следующим образом: натощак пациент сдает кровь из вены, которая потом тестируется разными методами:

  • Real-Time PCR проводится закрытым автоматизированным способом и имеет нижний лимит выявления вируса РНК, равный 15 МЕ/мл;
  • COBAS AMPLICOR с сенситивностью 50-100 МЕ/мл.

Чем выше порог чувствительности у диагностической методики, тем больше шансов обнаружить самое минимальное содержание вируса в исследуемом биологическом материале.

Какие разновидности анализа используют

Анализ, успешно применяемый уже несколько десятков лет называется ПЦР гепатит при этом выявляется достаточно просто и быстро. В медицине различают две методики проведения реакции, принципиально отличающиеся друг от друга:

  • качественный метод выявляет наличие в биологическом материале генетического источника определенного вируса;
  • количественный анализ измеряет число генетической материи, позволяющее определить стадию патологии или оценить эффективность проводимого терапевтического курса;
  • генотипирование определяет тип вируса, присутствующего в организме.

В целом анализ крови помогает выявить характер вирусемии и генетический тип возбудителя. Как правило, исследование проводится 1 раз в зависимости от степени чувствительности диагностической системы. При необходимости проводят повторное тестирование, используя ультрачувствительный реагент.

Качественный ПЦР

Что такое качественный ПЦР РНК на гепатит С? Суть реакции заключается в присутствии последовательности РНК гепатита, причем выполнение реакции возможно лишь в случае присутствия вирусных белков схожей этимологии в ИФА. В процессе сравнения выявляется нагрузка и возможное поражение области печени.

Отличительной особенностью данного метода является способность выявить даже наличие отдельного гена.

Следует отметить, что после получения результатов исследования ПЦР и ИФА, пациенту требуется соответствующее лечение, независимо от того, каким оказался итоговый иммуноферментный результат. Положительный свидетельствует об инфицировании, а ПЦР отрицательный — о сниженном количестве вирусных частиц относительно уровня чувствительности.

Существует несколько условий, влияющий на получение отрицательного показателя ПЦР и ИФА:

  • отсутствие соответствующих условий забора материала;
  • в полученном анализе присутствуют загрязнения;
  • в случае раннего введения пациенту инъекций гепарина.

Со стороны больного не требуется соблюдения определенных правил по забору крови на ПЦР анализ, в данном случае качество этого анализа зависит от медицинского работника, проводящего процедуру. Возможность установить присутствие заболевания (особенно в острой форме) появляется уже через несколько недель после инфицирования.

Количественный анализ

Количественный тест рекомендуется проводить для выявления вирусной нагрузки непосредственно перед формированием дальнейшей терапии и реакцией организма. Процесс забора крови проводится аналогичным образом, что при качественном ПЦР и ИФА, единственным условием является отсутствие возможности курения пациента перед процедурой.

Что касается характеристики полученных в результате изучения данных, то повышенная нагрузка характеризуется показателями от 800000 МЕ/мл, низкий — 400000 МЕ/мл. О присутствии вируса в организме пациента говорит ПЦР на гепатит не отрицательный качественный тест.

Подобного рода исследование дает возможность определить, насколько пациент опасен для окружающих его людей. Так, например, выявление высокого уровня говорит о повышенной заразности пациента. К тому же результаты анализа помогают сформировать дальнейшее наиболее эффективное лечение и определить, на сколько имеющаяся терапия считается действенной.

Быстрый отрицательный ответ тестов говорит об успешности выбранной методики, а медленное — о необходимости корректировки и использования разностороннего лечения.

Процесс проведения процедуры взятия анализа зависит от определенного дня течения заболевания. Первое определение проводится в первые сутки после поступления пациента в стационар, далее процедура повторяется на 4, 12 и 24 неделе после того, как был начат прием лекарственных средств.

Таким образом, количественный анализ показывает, какое лечение является наиболее эффективным, длительность имеющейся терапии и опасность пациента по отношению к другим людям.

Генотипирование

При исследовании материала анализа важно определить точность того генотипа вируса, который имеет место быть. В настоящее время существует 11 разновидностей вируса гепатита С, которые в свою очередь включают в себя определенные подвиды.

Все эти виды по-разному реагируют на различные способы лечения, при этом отдельные разновидности абсолютно устойчивы ко многим лекарственным препаратам.

Генотип дает возможность определить и показать состояние печени. Нередки случаи, когда в результатах записывается «не типируется», что означает, что вирус, находящийся в крови пациента не определяется данной тестовой системой. Подобное может быть выявлено в случае, если определенный генотип не соответствует данной зоне. В подобной ситуации забор анализа осуществляется повторно, при этом для исследования материала используется более чувствительная система.

Ультрачувствительный метод

Ультрачувствительный метод необходим в определенных случаях, когда диагностика гепатита не может осуществляться посредством других методов, при этом, когда сдавать анализ определяется лечащим врачом:

  • при подозрении присутствия вируса гепатита С у больных, имеющих скрытую разновидность заболевания;
  • присутствие антител относительно вируса гепатит С, не подтвержденный ПЦР-диагностикой;
  • с целью определения качества эффективности выбранной методики лечения, и подтверждения факта устранения заболевания.

Чувствительность данного метода значительно выше тех, которые обычно применяются, однако и этот метод не исключает получение ложных результатов, причем как положительных, так и отрицательных. В подобной ситуации важно контролировать качество проведения процедуры и возможность загрязнения самого материала.

Расшифровка анализа ПЦР

Расшифровка анализа проводится на основе представленных материалов, при этом в результаты лабораторных исследований включаются определенные данные, описанные выше.

Расшифровка может включать в себя выявление в анализе положительный ПЦР полимеразной цепной реакции и отрицательного значения ИФА значит, что у пациента в крови отсутствуют признаки гепатита С, однако в прошлом он перенос острую форму данного заболевания. Как правило, при диагностике специалисты прибегают к использованию именно показателей тестов ПЦР.

Подводя итог всему вышесказанному, можно сделать вывод о том, что при проведении анализа важно соблюдать все правила и рекомендации, чтобы полученные результаты были максимально точными, а на основе полученных данных можно было определить эффективность использующейся терапии и дальнейший шанс на полное выздоровление.

krov.expert


Смотрите также