Количественное определение рнк вируса гепатита с. Гепатит с количественный рнк


РНК вируса гепатита С

Вирус гепатита С (ВГС) – является РНК-содержащим вирусом из семейства Flaviviridae. Эта инфекция способна размножаться в клетках крови (моноцитах, нейтрофилах, В-лимфоцитах и макрофагах), а также поражать клетки самой печени – гепатоциты. Благодаря высокой степени мутационной активности данный тип гепатита способен избегать воздействия иммунной системы человека.

Есть 11 генотипов и масса субтипов такого вируса, которые отличаются степенью поражения печени и влияют на сроки лечения гепатита. Подобное разнообразие гепатита С требует различных методик противовирусной терапии. К примеру, гепатит 1-го и 4-го генотипов необходимо лечить 48 недель, а для курса терапии против вирусов 2-го и 3-го видов может потребоваться лишь 24 недели.

После того, как экспресс-тест на гепатит С дал положительный результат, проводят анализ ПЦР с целью выявления РНК данного вируса в пробах крови.

ПЦР-диагностика

Полимеразной цепной реакцией (ПЦР) называется экспериментальная методика для выявления вирусов. Такой анализ на гепатит С позволяет существенно увеличить концентрацию некоторых фрагментов ДНК или РНК вируса в сданных пробах. Это дает возможность их распознать и даже подсчитать количество.

кровь с пальца

Данный тест на гепатит С выполняют по следующей методике:

  1. Проба крови (генетический материал), который может содержать искомый ген гепатита, вносится в пробирку. К ней помещают специальные вещества – праймеры, они представляют собой отрезки небольшой длины из искомого гена, которые синтезированы химическим путем. В данный сосуд также добавляется ДНК или РНК полимераза, она способна выстраивать цепочки из нуклеиновой кислоты, полностью идентичные первоначальной. К полученному составу добавляется и подборка из свободных нуклеотидов, являющихся особым строительным материалом для ДНК и РНК, причем один из них содержит мельчайшие частицы из радиоактивного фосфора.
  2. Полученная смесь вначале подогревается до 95 градусов, вследствие чего переплетенные в обычном состоянии обе спирали ДНК из-за такого воздействия расплетаются.
  3. Для продолжения анализа препарат охлаждается, в этот момент праймеры прикрепляются к искомому участку генома вируса гепатита, не позволяя ДНК сформироваться в двойную спираль. Когда происходит остывание смеси, полимераза отыскивает именно одиночные цепочки из нуклеотидов. Во время прикрепления данного фермента он скользит по цепи ДНК (как блок по веревке), а на двойной спирали он не способен «работать», для этого и проводят подогрев смеси.
  4. Чтобы продлить анализ, выполняют повторное нагревание, которое вновь приводит к разделению цепочек нуклеотидов. При выполнении таких циклов ПЦР в пробе количество искомых генов гепатита возрастает в геометрической пропорции, а остальные генетические материалы продуцируются (формируются) лишь в линейной закономерности.
  5. Для завершения исследования проводят очистку раствора от остаточных частиц нуклеотидов. Их разделяют с помощью электрофореза, при этом происходит отделение по параметрам молекулярной массы цепочек ДНК. Такие анализы на гепатит с при помощи ПЦР позволяют определить, присутствуют искомые гены вируса в исследуемом образце или нет.

нагревание частиц

Достоинством данного теста является очень высокий порог чувствительности реакции ПЦР. Такой методике для проведения диагностики, в идеальном варианте, требуется всего одним геном вируса на всю пробу.

Кроме того, такая ПЦР полностью специфична. В каждом из генов есть уникальная последовательность из нуклеотидов, которая, как отпечаток пальца, не может нигде повторяться. Для этого анализа на гепатит С праймеры синтезируются таким образом, чтобы они абсолютно соответствовали уникальным участкам искомых генов, которых нет ни у одной другой последовательности.

Данная методика позволяет также провести анализ на гепатит в с и детерминировать их, помогая установить окончательный диагноз.

Такой лабораторный анализ позволяет получить информацию большую, чем просто наличие или отсутствие РНК вируса гепатита С либо другого типа в пробах крови. Определяя параметр радиоактивного излучения, существует и возможность выявлять, сколько искомого генетического материала изначально находилось в исследуемом образце. Это позволяет определить параметр так называемой вирусной нагрузки – концентрации частиц РНК гепатита в определенном объеме.

Качественный анализ ПЦР

Данный анализ позволяет определить факт наличия вируса гепатита в пробах крови. Его необходимо проводить для всех людей, у которых были обнаружены антитела к гепатиту.

колбы с анализами

В результате проведения такого исследования могут быть только два значения:

  • «Обнаружено». Такой положительный результат теста интерпретируется следующим образом: в анализируемом образце из биологического материала были найдены фрагменты РНК вируса гепатита. Из этого следует, что был факт инфицирования пациента данным вирусом. Это может свидетельствовать о том, что возбудитель гепатита размножается в организме и заражает новые клетки, разрушая печень.
  • «Не обнаружено». Этот результат говорит, что в образце, который анализировался в данной лаборатории, не были обнаружены фрагменты РНК, которые специфичны для вируса гепатита С. Есть также вероятность, что концентрация РНК вируса-возбудителя в исследуемом образце была настолько мала, что тест не смог ее выявить. В таких случаях говорят, что уровень концентрации находится ниже порога чувствительности анализа.

Такой тест может быть также и ложноположительным или ложноотрицательным, из-за загрязнения биоматериала или наличия в пробах специфических веществ, реагирующих с химическими компонентами, необходимыми для проведения анализа.

Следует подчеркнуть, что в острых фазах гепатита С качественное исследование по методу ПЦР может выявлять его РНК уже после 1-2 недель от момента инфицирования организма. Это значит, что выявлять болезнь можно задолго до проявления ее внешних симптомов или появления в организме антител к гепатиту.

Забор крови (из вены) желательно выполнять натощак.

Количественный анализ ПЦР

При помощи данного анализа определяют уровень концентрации вируса гепатита у больного (вирусную нагрузку). Такой тест нужно сдать, чтобы оценить количество РНК вируса в единице определенного объема.

Расшифровка анализов на гепатит с, проведенная по такой методике, может иметь следующие результаты:

  • Количественный показатель (в цифрах)
  • Концентрация вируса (количество) приводится в цифровом выражении. Для этого используются разные показатели единиц измерения: либо МЕ/мл (международная единица на миллилитр), либо копий/мл (количество копий РНК вируса в миллилитре). В среднем 1 МЕ/мл соответствует 4 копиям/мл, поскольку разные тест системы имеют различные коэффициенты перевода таких единиц измерения.

    Низким уровнем вирусной нагрузки считают значения данного анализа меньше 400000 МЕ/мл, а высоким является показатель 8000000 МЕ/мл.

    работники в лаборатории

    Такая количественная оценка позволяет определить уровень инфекционности заболевания («заразность») больного. Чем больше этот показатель анализа, тем выше вероятность риска передачи возбудителя другим людям (при половом контакте или вертикальным путем).

  • Результат «Ниже диапазона измерений»
  • Этот вердикт означает, что количественный метод не смог обнаружить РНК гепатита, однако сам вирус присутствует в организме, только в очень малой концентрации. Это было подтверждено проведением дополнительного качественного анализа ПЦР, и он своим положительным результатом свидетельствует о факте присутствия гепатита.

  • Результат «Не обнаружено»
  • Данная положительная расшифровка анализа говорит о том, что сам количественный тест в пробе крови не смог обнаружить специфических РНК частиц вируса гепатита С.

Количественный анализ ПЦР, проводимый на разных сроках противовирусной терапии (1-я, 4-я, 12-я и 24-я недели) позволяет судить об эффективности лечения и делать необходимые поправки.

Специфика анализа

Данный тест нужно сдать, чтобы определить различные генотипы гепатита С. В настоящее время известно 11 генотипов данного возбудителя и множество субтипов. В нашей стране распространены генотипы гепатита С 1-го, 2-го и 3-го видов. В лабораториях могут выявлять разнообразные субтипы этих видов: 1а, 1в, 2а, 2в, либо 3, 4, 5, 6 генотипы с различными модификациями субтипов. Для всех этих гепатитов специфичность определения составляет 100%.

Уточнение модификации генотипа дает возможность подбирать соответствующее лечение. Наличие у больного тех или иных видов генотипа не свидетельствует от том, что заболевание легче или сложнее, они являются лишь разновидностями вируса гепатита, и не больше.

В тех случаях, когда в лаборатории не могут выделить генотип вируса, может быть выдан результат: «Не типируется. Были исследованы генотипы: такие-то» (к примеру, 1а, 2в, 3ав). Эта расшифровка говорит о том, что в данной лаборатории не было соответствующих реагентов, которые смогли бы детерминировать генотип вируса гепатита. При исследовании проводилась проверка на вирусы, данные в перечне, но соответствия их с образцами РНК не были выявлены.

Чтобы поставить окончательный диагноз, недостаточного лишь одного вида анализа. Каждый из тестов может дать ложноположительный результат. Для точного определения типа гепатита и степени поражения этой инфекцией организма проводят комплексное исследование. При этом делается биопсия печени и тестирование ее ферментов: АлАТ, АсАТ, а также ЩФ и ЛДГ. Может выполняться также тест на билирубин и анализ протромбинового индекса.

Лишь комплекс таких тестов и лабораторных исследований, с общим анализом состояния больного поможет определить наличие гепатита в организме, его форму, а также степень выраженности. На их основании доктор может определить дальнейшее лечение и сделать возможный прогноз для больного.

veneradoc.ru

РНК вируса гепатита С: количественное исследование, норма

Вирус гепатита С попадает в организм преимущественно через кровь, причем для заражения порой достаточно одного контакта. Болезнь развивается постепенно. И когда тревожные симптомы еще невозможно заметить, вирус уже может активно размножаться, поражая ткани печени. Количественный анализ на гепатит С помогает определить, насколько сильно поражен организм, имеется ли в наличии заболевание и на какой стадии пребывает.

Способы диагностирования заболевания

Определение такой страшной болезни — задача не из легких хотя бы потому, что на ранних стадиях гепатит никак себя не проявляет. Чаще всего для диагностирования врачи обращаются к следующим методикам:

  • внешний осмотр и опрос пациента;
  • ПЦР-анализ крови на наличие или отсутствие молекулы РНК гепатита;
  • биохимический и общий анализ крови;
  • анализ на маркеры заболевания;
  • УЗИ брюшной полости, с помощью которого удается заметить изменения в состоянии внутренних органов;
  • биопсия печени с забором ткани с помощью специальных методик.

На поздних стадиях развития недуга заметить признаки вирусного заболевания несложно, ведь кожные покровы обретают желтушный цвет, человека постоянно беспокоит боль в области правого подреберья, может возникнуть асцит. Однако на этой стадии излечение уже невозможно: болезнь давно перешла в хроническую стадию, а значит, она вот-вот обернется циррозом или язвой.

Определять болезнь нужно как можно раньше, но тут возникают проблемы. Вирус не сразу начинает оказывать негативное влияние на печень, и еще несколько месяцев орган может работать бесперебойно. На этой стадии биохимический анализ может не показать существенных изменений, и даже биопсия порой не дает результатов.

Спасением для пациента становится анализ ПЦР на гепатит, с помощью которого удается определить количественные показатели, сделав выводы о наличии или отсутствии заболевания. Главное достоинство этого анализа состоит в том, что он очень точен и может показать наличие или отсутствие вируса уже через 10–14 дней после заражения. На этой стадии велик шанс приостановить развитие болезни, не допустив ее прогресса в хроническую стадию.

Качественный и количественный анализ

Расшифровать анализы под силу только опытному врачу. Часто на ранних стадиях вирус практически незаметен, и поэтому врачи, проведя ПЦР, его просто не замечают. Однако, чем раньше болезнь будет определена, тем позитивнее в итоге окажется прогноз.

Для постановки диагноза используется качественный анализ. Врач берет кровь на исследование и пытается обнаружить РНК вируса. Нормальные анализы его лишены, но если он был обнаружен, то специалисту нужно определить тип болезни. Заражение гепатитом А, В и С происходит разным образом, да и методики лечения заметно отличаются.

Количественный анализ проводится лишь в том случае, если качественный оказался положительным. В каких случаях нельзя обойтись без проведения такой процедуры:

  • Для определения наличия вируса и постановки итогового диагноза.
  • Для определения стадии развития недуга.
  • Врачи используют методику для определения перехода заболевания в хроническую стадию.
  • Необходима она и для мониторинга эффективности противовирусного лечения.

Расшифровывать анализ должен исключительно специалист, и тут важно опираться на точность исследования. В идеале РНК вирус должен отсутствовать. Если же в крови он имеется, то приходится вычислять, насколько сильно он распространен.

Сдавать биологический материал для такого анализа придется неоднократно, поскольку специалист должен отслеживать эффективность лечения. При его высокой результативности концентрация РНК-вируса в крови неизменно снижается.

При гепатите С количественный показатель вычисляется в случае острой стадии хронической болезни. Врачи делают примерные прогнозы продолжительности жизни.

Иногда обнаружить вирус в крови не удается, потому что имеет место ложноотрицательный результат. Бывает и противоположный — ложноположительный. Количественное исследование должно проводиться несколько раз, чтобы наверняка выявить коварную болезнь.

Количественные показатели: норма и превышение

Показатели РНК вируса гепатита С при количественном исследовании в норме демонстрируют полное отсутствие вируса. Если же врач замечает хотя бы минимальное его содержание в крови, речь идет о заражении. Варианты:

  1. В норме полимеразная цепная реакция не должна превышать 400 МЕ/мл. Такой показатель означает, что концентрация вируса очень мала и человек вряд ли может заразить окружающих. Однако болезнь есть, поэтому необходимо проводить срочную терапию.
  2. Если этот показатель выше 800 МЕ/мл, то речь идет о прогрессе болезни, хронической стадии ее развития. В таких случаях необходимо проводить максимально интенсивную лекарственную терапию, а иначе болезнь способна довести человека до летального исхода.
  3. Если этот показатель превышает 1 млн/мл, то речь идет о критическом развитии гепатита С. Вероятность летального исхода в ближайший месяц составляет 80%.

Количественный анализ на гепатит С расшифровку имеет разную, все зависит от стадии заболевания, пола и возраста пациента. Например, у мужчин концентрация вируса может быть выше 400 МЕ/мл, но болезнь будет все еще пребывать на ранних стадиях развития.

Врачи предпочитают проводить такие исследование на 1, 4, 23 и 12 неделях лечения. Это необходимо для того, чтобы проследить эффективность применяемых методик. Например, если на первой неделе показатель был 800 МЕ/мл, а к 12-й он стал 300 МЕ/мл, значит, лечение оказалось эффективным и заболевание начало отступать.

Врачи отмечают, что в 25% случаев удается если не победить болезнь, то хотя бы отсрочить следующий рецидив.

Помимо методики ПЦР-исследования крови, которая считается довольно дорогостоящей, используются и иные:

  • Применяется метод Р-ДНК, который стоит недорого, но имеет низкую чувствительность. Тут наличие вируса определяется лишь при его концентрации выше 500 МЕ/мл.
  • Популярен и метод транскрипционной амплификации (ТМА), главное достоинство которого кроется в высокой чувствительности при минимальной стоимости. Благодаря такому методу определить вирус удается даже при концентрации от 5–10 МЕ/мл.

«Гепатит С» — серьезный диагноз, часто означающий, что пациент умрет в ближайшие 5–10 лет. Однако методика ПЦР-исследования крови помогает определить болезнь на самых ранних стадиях и с помощью медикаментозной терапии остановить ее развитие.

vrednye.ru

Выявление рнк вируса гепатита с методом пцр. Вирусные гепатиты. LuchshijLekar.ru

Вирус гепатита С, РНК HCV, ПЦР real-time качественный

Другие анализы раздела

Биоматериал: цельная кровь (ЭДТА).

Вирус гепатита С, РНК HCV, ПЦР real-time качественный – метод определения РНК вируса гепатита С в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени . Данный метод ныне является самым быстрым и достоверным метод диагностики инфекционных заболеваний.

Вирус гепатита С (ВГС, HCV) поражает клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты).

Основной путь передачи вируса гепатита С – кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты), реже заражение половым путём. Одним из основных факторов риска инфицирования является употребление инъекционных наркотиков.

Основные клинические проявления гепатита С очень неспецифичны: слабость, утомляемость, тошнота, отсутствием аппетита, потеря веса, при циррозе печени может появиться желтуха. Как правило, гепатит С протекает бессимптомно и в большинстве случаев диагностируется случайно. Гепатит C может вызвать как острую, так и хроническую инфекцию гепатита, которая влечет серьезное пожизненное заболевание. Попадая в организм, вируса гепатита С (HCV) проникает в макрофаги крови и гепатоциты печени, где происходит его возобновление. Печень повреждается главным образом за счет иммунного лизиса, также вирус оказывает прямое цитопатическое действие. В отличии от других вирусных гепатитов, гепатит С имеет менее яркую клиническую картину и в большинстве случаев переходит в хронические формы. Чаще всего хронический гепатит С приводит к развитию цирроза печени и очень редко - к развитию гепато-целлюлярной карциномы. С большой частотой возникают аутоиммунные осложнения.

Длительность латентого периода от 6 до 8 недель. В конце которого наблюдается повышение уровня печеночных трансаминаз, возможно увеличение печени и селезенки. Острый период протекает со слабостью, снижением аппетита. В 30% случаев возникает лихорадка, артралгия, полиморфная сыпь. Возможны диспептические явления и полинейропатии. Очень редко возникает холестаз. Лабораторные показатели отражают цитолиз. При высоком уровне трансаминаз (более 5 норм) и признаках печеночно-клеточной недостаточности следует заподозрить микст-инфекцию: HCV+HBV. Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и в большинстве случаев остаётся невыявленным. Наиболее тяжелые исходы хронического гепатита С – цирроз печени и гепатоцеллюлярная карцинома.

Качественное определение содержания РНК гепатита С в клинических образцах позволяет подтвердить присутствие вируса гепатита С и его активное размножение.

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.

Общие правила при подготовке к исследованию:

  • По возможности, рекомендуется сдавать кровь утром, в период с 8 до 11 часов, натощак (не менее 8 часов и не более 14 часов голода, питье – вода, в обычном режиме), накануне избегать пищевых перегрузок.
  • Если вы принимаете какие-то лекарственные препараты, следует проконсультироваться с врачом по поводу целесообразности проведения исследования на фоне приёма препаратов или возможности отмены приёма препарата перед исследованием, длительность отмены определяется периодом выведения препарата из крови.
  • Алкоголь – исключить приём алкоголя накануне исследования.
  • Курение - не курить минимально в течение 1 часа до исследования.
  • Исключить физические и эмоциональные стрессы накануне исследования.
  • После прихода в медицинский офис рекомендуется отдохнуть (лучше - посидеть) 10-20 минут перед взятием проб крови.
  • Нежелательно сдавать кровь для лабораторного исследования вскоре после физиотерапевтических процедур, инструментального обследования и других медицинских процедур. После некоторых медицинских процедур (например, биопсия предстательной железы перед исследованием ПСА) следует отложить лабораторное обследование на несколько дней.
  • При контроле лабораторных показателей в динамике рекомендуется проводить повторные исследования в одинаковых условиях: в одной лаборатории, сдавать кровь в одинаковое время суток и пр.
  • Клинические признаки гепатита.
  • Профилактические скрининговые исследования (РНК вируса гепатита С - самый ранний маркёр при острой инфекции).
  • Обследования контактных лиц.
  • Диагностика гепатитов смешанной этиологии - выявление ведущего вируса.
  • Выявление стадии активной репликации вируса при хроническом состоянии.
  • Контроль эффективности проводимой терапии.
  • Цирроз печени.

Тест качественный. Результат выдаётся в терминах обнаружено или не обнаружено .

обнаружено : в анализируемом образце биологического материала найден фрагмент РНК, специфичный для вируса гепатита С, инфицирование вирусом гепатита С;

не обнаружено : в анализируемом образце биологического материала не обнаружен фрагмент РНК, специфичный для вируса гепатита С или концентрация РНК возбудителя в образце ниже границы чувствительности теста.

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

Точное определение РНК вируса гепатита С методом ПЦР

Бороться с ВГС крайне сложно – благодаря способности к мутации возбудитель недуга избегает иммунного ответа организма. Кроме того, диагностика гепатита С затруднена отсутствием симптомов – у носителей вируса часто нет видимых причин для обращения к гепатологу и прохождения ПЦР. ВГС имеет 6 генотипов и множество субтипов, их правильное определение является обязательным условием успешного лечения. Чтобы предотвратить трансформацию гепатита С в хроническую форму и получить шанс на восстановление работы печени, следует записаться на прием к врачу, обнаружив хотя бы один из признаков недуга. Наиболее распространены следующие симптомы: быстрая утомляемость, отсутствие аппетита, пожелтение кожи, боль в правом боку.

Что показывает ПЦР анализ

Для диагностики гепатита С часто используется анализ ПЦР – полимеразная цепная реакция. Данный метод позволяет увеличить концентрацию в пробе (биологическом материале) некоторых фрагментов ДНК. Благодаря эффективности и высокой точности анализ широко применяется в медицинской практике – с его помощью диагностируются наследственные и инфекционные заболевания. Суть анализа крови методом полимеразной цепной реакции заключается в многократном копировании определенного фрагмента ДНК. Выбранный участок должен удовлетворять заданным требованиям.

ПЦР диагностика при гепатите С

Полимеразная цепная реакция помогает гепатологу поставить окончательный диагноз. С помощью метода можно определить, есть ли в исследуемом материале HBV. Качественный метод позволяет подтвердить факт заражения и установить патогенез заболевания. Количественный анализ ПЦР дает информацию о том, насколько интенсивно развивается гепатит С. На основании полученных в результате диагностики данных врач назначает пациенту наиболее эффективный курс терапии.

Для нахождения в крови ВГС сегодня применяются специальные тест-системы. Метод ПЦР назначается, если:

  • результаты серологических исследований сомнительны;
  • нужно определить генотип вирусного гепатита С;
  • необходимо проконтролировать результативность противовирусного лечения.

Анализ осуществляется следующим образом: генетический материал (кровь) помещается в пробирку, к нему добавляются праймеры, ДНК-матрица, буферный раствор. Затем смесь нагревается до 95°С и охлаждается. После удаления из раствора остатков нуклеотидов специалист может определить, есть ли в исследуемом образце искомый ген. Если при диагностике методом ПЦР в крови пациента выявляется вирус гепатита С, врач определяет стадию заболевания и назначает курс лечения.

Анализ ПЦР РНК (качественный)

В результате качественного анализа может быть установлен только факт наличия вируса гепатита С в крови. Прохождение данного теста назначается всем, у кого выявлены антитела к ВГС. Результат исследования однозначен, возможны две формулировки: «обнаружено» и «не обнаружено». Первый вариант свидетельствует о том, что человек инфицирован, гепатит С прогрессирует и поражает новые клетки печени. Результат «не обнаружено» подтверждает отсутствие в крови ВГС. Наличие вируса в организме может быть выявлено качественным методом полимеразной цепной реакции только через одну-две недели после инфицирования.

Анализ ПЦР РНК (количественный)

Концентрацию вируса гепатита С (виремию) позволяет с высокой точностью установить количественный анализ ПЦР. Определив вирусную нагрузку (количество РНК), можно выбрать оптимальный способ лечения. Чем ниже уровень концентрации вируса, тем больше шансов на полное выздоровление. Количественный анализ используется не только во время начальной диагностики, но и в течение терапии. С его помощью можно контролировать успешность лечения и прогнозировать дальнейшее развитие болезни. Если прием медикаментов не приносит пользы, то количественное исследование укажет на отсутствие изменений. Такой результат должен стать основанием для внесения корректив в лечение.

Достоинства метода

Диагностический метод ПЦР имеет множество преимуществ, среди которых следует выделить чувствительность и точность. Анализ позволяет получить максимум информации о том, как ведет себя в организме больного РНК-вирус. Результаты исследования являются основой для подтверждения диагноза, если последний по какой-либо причине вызывает сомнения. Еще одно достоинство полимеразной цепной реакции заключается в возможности использовать для анализа различный биологический материал – не только кровь, но и мочу, слюну и другие выделения. Количественные и качественные исследования выполняются максимально быстро, что позволяет пациенту не томиться в ожидании результатов, а как можно раньше начать лечение.С помощью ПЦР можно определить, какова на данный момент активность вируса гепатита С и чем она угрожает больному. Если гепатолог назначил пациенту эффективную терапию, полимеразная цепная реакция покажет, что ВГС прекращает заражать новые клетки. Как правило, к такому результату приводит прием качественных медикаментов – например, индийских дженериков.

Количественное определение вируса Гепатита С методом ПЦР в режиме реального времени

Определение вируса гепатита С методом полимеразной цепной реакцией (ПЦР) отличается высокой чувствительностью и специфичностью (98%). Принцип ПЦР заключается в идентификации уникального фрагмента РНК, принадлежащего вирусу, после многократного удвоения исследуемого генетического материала в пробирке.

В сети КДЛ «ОЛИМП» ПЦР-исследования выполняются в режиме REAL-TIME – это означает, что после каждого аппаратного цикла (амлификации) происходит измерение количества РНК в биоматериале. Данная процедура сводит вероятность ложноположительного результата практически к нулю! Такая точность позволяет выставить диагноз гепатита С.

Количественный метод отображает вирусную нагрузку, то есть меру тяжести гепатита, путем указания количества вирусных частиц в крови пациента. Прежде всего, анализ необходим в нескольких случаях: при положительном качественном («положительно») выявлении вируса гепатита С, а также для мониторинга эффективности противовирусной терапии и определения тактики лечения.

Вирусная нагрузка измеряется в Международных Единицах на миллилитр крови. Меньше 1 млн – считается низкой, свыше – высокой. В КДЛ ОЛИМП имею​тся два анализатора с разной чувствительностью 300 МЕ/мл и 15 МЕ/мл (COBAS TaqMan).​ ​Е​сли количество вирусных частиц​ меньше указанных цифр – то результат расценивается как отрицательно .

Показания к назначению

Обнаружение РНК вируса гепатита С в плазме крови методом ПЦР;

Определение вирусной нагрузки ВГС;

Оценка эффективности лечения и определение тактики противовирусной терапии.

Результат выдается в виде количества вирусных частиц. Пример: «1,7*10 в 6ст. МЕ/мл », так как 1 МЕ = 4 вирусным копиям гепатита С. то 1,7 х 4 = 6,8. Результат означает, что вирусная нагрузка равна 6 800 000 копий вируса в 1 мл плазмы крови.

1 МЕ = 4 вирусным копиям гепатита С.

Результат меньше 300 МЕ/мл – считается отрицательным.

Источники: http://www.dnk-diagnostika.ru/analizy-i-tseny/analizy-po-razdelam/virus-gepatita-s-hcv.html, http://india-expres.ru/stati/tochnoe-opredelenie-rnk-virusa-gepatita-c-metodom-ptsr.(c), http://www.kdlolymp.kz/ru/node/3773

Комментариев пока нет!

www.luchshijlekar.ru

Количественное определение рнк вируса гепатита с

|

Генопирование вируса гепатита С

Вирус гепатита С отличается высокой изменчивостью — способностью к мутациям (изменениям в генетическом строении). Способность к изменению позволяют вирусу ускользать от иммунной системы и затрудняет лечение гепатита С. В действительности, вирус гепатита С — это целый спектр подобных вирусов, которые можно выделить в отдельные подгруппы, которые классифицируют по генотипам и субтипам.

Насчитывают 11 генотипов ВГС. однако в России распространены 3 основных генотипа — 1, 2 и 3, поэтому большинство диагностических центров определяют генотипы (генотипируют ) 1, 2 и 3.

Генотипирование (определение генотипа вируса) — один из самых важных анализов. Он позволит предсказать шансы на успешное лечение и поможет врачу определить необходимые дозы препаратов и длительность терапии.

Зачем нужно определять генотип?

Это очень важный анализ. Разные генотипы имеют различную резистентность (устойчивость) к лечению. Так, например, генотипы 2 и 3 лечатся стандартной терапией в течение 24 недель с эффективностью до 85%, а генотип 1 и 4 — 48 недель с эффективностью до 60%.

Имеет ли значение субтип генотипа, например 1a?

Нет, клинического значения субтип не имеет. Главное·— определить цифру (сам генотип).

Что значит, если в результатах генотипирования стоит

Это может быть по двум причинам — у Вас не типичный для нашего региона, «экзотический» генотип HCV или низкая концентрация вирусной РНК в крови.

Может ли генотип измениться с течением времени?

Нет, для этого требуется тысячи лет. У некоторых пациентов имеется 2 и более генотипов, но преобладает один. В таком случае анализом может обнаружиться только один генотип. Бывают случаи, когда у пациентов определяли, к примеру, генотип 3a, а после лечения выявляли генотип 1b. Причиной тому было одновременное присутствие генотипов 3 и 1b. От первого типа удалось избавиться в результате терапии, а второй из-за устойчивости к препаратам оставался в организме.

Количественное определение РНК гепатита С

Почему важно делать количественное определение РНК вируса гепатита С?

Количественная характеристика содержания РНК вируса гепатита С в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для определения хронизации этого гепатита. Если концентрация вируса меньше 8х10 5 МЕ/мл (2х10 6 копий/мл), то прогноз курса лечения благоприятный, если выше - то рекомендуют использовать другие схемы лечения. Вирусная нагрузка ниже 8х10 5 МЕ/мл (2х10 6 копий/мл) наряду с определением генотипа вируса является независимым и самым точным параметром эффективности лечения. Снижение концентрации РНК вируса гепатита С к третьему дню от начала терапии на 85% является быстрым и точным параметром для предсказания эффективности терапии, приводящей к раннему вирусологическому ответу.

Показания к назначению анализа:

Положительный качественный тест на наличие РНК вируса гепатита С в сыворотке крови.

Определение тактики лечения пациентов.

Точная оценка эффективности лечения.

Консультативно-диагностическая поликлиника НПО «ВИРИОН» предлагает широкий спектр современной лабораторной диагностики гепатита С и других заболеваний печени.

Рнк гепатита с что это такое

Что такое вирусный гепатит С?

Это может свидетельствовать о том, что возбудитель гепатита размножается в организме и заражает новые клетки, разрушая печень. По этой причине вирусный гепатит С зачастую называют «бомбой замедленного действия» или «ласковым убийцей».

Исследование РНК вируса гепатита С является наиважнейшей процедурой, которая позволяет с большой точностью устанавливать длительность и методы лечения больных. Первое исследование делается при первом подозрении на гепатит. Вирусный гепатит C, или HCV, это инфекционная болезнь, поражающая печень. Важнейшая опасность гепатита С состоит в том, что он протекает скрытно, без желтушных признаков.

Очень низкое значение удельного содержания вируса наблюдается среди пациентов, для которых назначена противовирусная терапия. Поэтому важным является тот факт, насколько высока чувствительность медицинской системы для диагностирования и постановки качественного результата при полимеразной цепной реакции. Зачастую полимеразная цепная реакция C-гепатита проводится сразу же после нахождения соответствующих антител.

И еще один анализ после прекращения ПВТ делается через 24 недели. Содержание вируса иногда представляется по-разному, это зависит от лабораторий, где проводятся исследования. Так риск заразить вирусом другого человека повышается при повышении концентрации гепатита в составе крови. К тому же высокое содержание вируса снижает эффект от проводимого лечения.

К тому же тест гепатита С и его определение методом ПЦР играют большую роль при применении терапии от болезни и определения успешности лечения. Например, при слишком медлительном уменьшении удельной концентрации вируса гепатита, противовирусная терапия продлевается, и наоборот.

В общих случаях количественный анализ на гепатит делается перед проведением противовирусной терапии и через 3 месяца по окончании лечебных процедур для определения качества проведенной терапии. Параметр чувствительности качественного теста обычно ниже, чем чувствительность количественного анализа.

Определение генетического типа играет ключевую роль при выборе сроков лечения, что очень необходимо, если принять во внимание обширный спектр побочных эффектов лекарств от гепатита.

Что такое вирусный гепатит С?

Единственным действенным способом вылечить вирус гепатита, как правило, оказывается сочетание 2-х медпрепаратов: интерферона-альфа совместно с рибавирином. Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы.

Гепатит C и его генотипы

Количество вируса может быть отображено по-разному. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена. Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется. Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Благодаря высокой степени мутационной активности данный тип гепатита способен избегать воздействия иммунной системы человека. Есть 11 генотипов и масса субтипов такого вируса, которые отличаются степенью поражения печени и влияют на сроки лечения гепатита.

К примеру, гепатит 1-го и 4-го генотипов необходимо лечить 48 недель, а для курса терапии против вирусов 2-го и 3-го видов может потребоваться лишь 24 недели. Проба крови (генетический материал), который может содержать искомый ген гепатита, вносится в пробирку. Для продолжения анализа препарат охлаждается, в этот момент праймеры прикрепляются к искомому участку генома вируса гепатита, не позволяя ДНК сформироваться в двойную спираль.

Для гепатита С количественное определение иногда использует такие значения, как копии/мл. При показателе теста «ниже измеренного диапазона» анализ количественного типа, скорее всего, не нашел РНК гепатита, хотя это подтверждает наличие вируса с очень маленьким удельным содержанием.

Похожее:

Вирус гепатита С, определение РНК кол. (HCV-RNA, quantitative)

Вирус гепатита С (HCV) - РНК-содержащий вирус размером вириона 30-60 нм. Главным образом передается парентеральным путем (через инфицированную кровь и её компоненты). Инфицирование возможно при парентеральных манипуляциях, в том числе в медицинских учреждениях, включая оказание стоматологических услуг, через инъекционное оборудование, при акупунктуре, пирсинге, нанесении татуировок, при оказании ряда услуг в парикмахерских. Главная особенность вируса гепатита С – его генетическая изменчивость, выраженная способность к мутациям. Известно 6 основных генотипов вируса гепатита С. Однако, благодаря мутационной активности вируса, в организме человека могут присутствовать около четырех десятков подвидов HCV. в рамках одного генотипа. На территории РК преимущественно распространенны генотипы 1b, 2 и 3. Это один из важных факторов, определяющих персистенцию вируса и высокую частоту развития хронических форм гепатита С.

Иммунная система человека просто не в состоянии контролировать выработку нужных антител - пока вырабатываются антитела на одни вирусы – уже образуются их потомки с иными антигенными свойствами.

Для постановки диагноза используют комплексный подход, ключевую роль в котором играют лабораторные исследования.

Первый анализ, который обычно рекомендуют сделать – это определение антител к вирусу гепатита С (анти-HCV). Этот анализ устанавливает только факт инфицирования в настоящем или прошлом. Кроме того, этот анализ может давать ложно-положительные (анализ положительный, но инфекции на самом деле нет) и ложно-отрицательные результаты (анализ отрицательный, но инфекция на самом деле есть), по разным причинам. Поэтому для точной диагностики гепатита С выполняется более сложное обследование для определения наличие РНК вируса гепатита С в крови. В настоящее время для этой цели используется качественное определение РНК вируса гепатита С (HCV RNA) с помощью высокочувствительной ПЦР диагностики в режиме реального времени с нижним лимитом определения 15 МЕ/мл с использованием автоматизированных систем закрытого типа . Для сравнения применяемые ранее анализаторы имели порог чувствительности 300 МЕ/мл. Таким образом, оно подтверждает как наличие инфекции, так и факт репликации (размножения) вирусов в организме. Количество вирусов в крови (вирусная нагрузка ) позволяет судить об активности или скорости размножения вирусов. Чем выше вирусная нагрузка, тем активнее репликация вирусов. Высокая вирусная нагрузка – это фактор, ухудшающий эффективность противовирусной терапии. Чем ниже вирусная нагрузка, тем выше шансы успешного излечения. Кроме того, если содержание вируса высокое, то больной с большей вероятностью может заразить других лиц (половых партнеров, членов семьи).

В целом, вирусологическая диагностика проводится исходя из следующих принципов:

ƒ1. Определение anti-HCV – первая линия диагностики ВГС (рекомендация А1).

ƒ2. В случае подозрения на острый ВГС или у иммуносупрессивных пациентов необходимо определение HCV RNA (рекомендация А1).

ƒ3.Если тест на anti-HCV положительный, необходимо определить HCV RNA чувствительным молекулярным методом (рекомендация А1).

ƒ4. Пациенты с положительным тестом anti-HCV и отрицательным молекулярным тестом на HCV RNA должны быть протестированы на HCV RNA через 3 месяца для подтверждения элиминации вируса (рекомендация А1).

*«Клинический протокол диагностики и лечения хронического гепатита С у взрослых» Нерсесов А.В. Калиаскарова К.С. Джумабаева А.Е. Журнал «Человек и Лекарство», г. Алматы, Казахстан № 6 (37) с.2-20, г.

Источники: http://virion.tom.ru/index.php/-03-21-17-53-38/78--06-27-11-41-16, http://izlechisebya.ru/chto-delat-pri-gepatite/rnk-gepatita-s-chto-jeto-takoe.html, http://www.kdlolymp.kz/ru/services/virus-gepatita-s-opredelenie-rnk-kol-hcv-rna-quantitative

Комментариев пока нет!

www.dolgojiteli.ru

Рнк вируса гепатита с количественное исследование норма — Болезни полости рта

Вирус гепатита С — это вирус, который содержит молекулу РНК. Он способен избегать иммунного ответа организма благодаря высоким способностям к мутации. Различают шесть основных генотипов вируса и множество субтипов. В нашем регионе в основном распространены 1, 2 и 3 генотипы.

У 75–80 % болезнь переходит в хроническую форму, что вызывает фиброз печени — состояние, при котором ткани печени заменяются соединительной тканью. Фиброз, в свою очередь, приводит к раку или циррозу. Основной путь передачи заболевания — через кровь. Если у человека имеются показания к проведению теста на гепатит С, ему проводят два основных теста. Определяют антитела к вирусу, и при их отсутствии считается, что гепатита у него нет. Если же в крови обнаруживается наличие антител к вирусу гепатита, проводится анализ методом ПЦР.

РНК таким методом определяется в крови уже через 10–12 дней после инфицирования и свидетельствует о том, что вирус активно размножается в организме. В этот период обнаружить вирус другим способом просто невозможно, так как специфических антител он еще не вырабатывает и поражения печени еще незаметны при биохимических анализах и биопсии.

Разновидности исследований методом ПЦР

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:

  1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
  2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
  3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса. Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется:

  • для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»,
  • для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни,
  • для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения.

Исследование проводится при наличии таких показаний:

  • гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела,
  • при микст-гепатитах,
  • если планируется проведение противовирусной терапии,
  • во время и после лечения от гепатита С,
  • при наличии хронического и острого гепатита С.

Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см? или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах. Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку.

Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови.

ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования.

Результаты количественного анализа определение РНК вируса, представленные лабораторией, расшифровываются следующим образом:

https://immco.ru/category/sofvel/ https://immco.ru/category/sofled/

glivec.su