Количественное исследование РНК вируса гепатита С. Рнк гепатита с


РНК вируса гепатита С: количественное исследование, норма

Вирус гепатита С попадает в организм преимущественно через кровь, причем для заражения порой достаточно одного контакта. Болезнь развивается постепенно. И когда тревожные симптомы еще невозможно заметить, вирус уже может активно размножаться, поражая ткани печени. Количественный анализ на гепатит С помогает определить, насколько сильно поражен организм, имеется ли в наличии заболевание и на какой стадии пребывает.

Способы диагностирования заболевания

Определение такой страшной болезни — задача не из легких хотя бы потому, что на ранних стадиях гепатит никак себя не проявляет. Чаще всего для диагностирования врачи обращаются к следующим методикам:

  • внешний осмотр и опрос пациента;
  • ПЦР-анализ крови на наличие или отсутствие молекулы РНК гепатита;
  • биохимический и общий анализ крови;
  • анализ на маркеры заболевания;
  • УЗИ брюшной полости, с помощью которого удается заметить изменения в состоянии внутренних органов;
  • биопсия печени с забором ткани с помощью специальных методик.

На поздних стадиях развития недуга заметить признаки вирусного заболевания несложно, ведь кожные покровы обретают желтушный цвет, человека постоянно беспокоит боль в области правого подреберья, может возникнуть асцит. Однако на этой стадии излечение уже невозможно: болезнь давно перешла в хроническую стадию, а значит, она вот-вот обернется циррозом или язвой.

Определять болезнь нужно как можно раньше, но тут возникают проблемы. Вирус не сразу начинает оказывать негативное влияние на печень, и еще несколько месяцев орган может работать бесперебойно. На этой стадии биохимический анализ может не показать существенных изменений, и даже биопсия порой не дает результатов.

Спасением для пациента становится анализ ПЦР на гепатит, с помощью которого удается определить количественные показатели, сделав выводы о наличии или отсутствии заболевания. Главное достоинство этого анализа состоит в том, что он очень точен и может показать наличие или отсутствие вируса уже через 10–14 дней после заражения. На этой стадии велик шанс приостановить развитие болезни, не допустив ее прогресса в хроническую стадию.

Качественный и количественный анализ

Расшифровать анализы под силу только опытному врачу. Часто на ранних стадиях вирус практически незаметен, и поэтому врачи, проведя ПЦР, его просто не замечают. Однако, чем раньше болезнь будет определена, тем позитивнее в итоге окажется прогноз.

Для постановки диагноза используется качественный анализ. Врач берет кровь на исследование и пытается обнаружить РНК вируса. Нормальные анализы его лишены, но если он был обнаружен, то специалисту нужно определить тип болезни. Заражение гепатитом А, В и С происходит разным образом, да и методики лечения заметно отличаются.

Количественный анализ проводится лишь в том случае, если качественный оказался положительным. В каких случаях нельзя обойтись без проведения такой процедуры:

  • Для определения наличия вируса и постановки итогового диагноза.
  • Для определения стадии развития недуга.
  • Врачи используют методику для определения перехода заболевания в хроническую стадию.
  • Необходима она и для мониторинга эффективности противовирусного лечения.

Расшифровывать анализ должен исключительно специалист, и тут важно опираться на точность исследования. В идеале РНК вирус должен отсутствовать. Если же в крови он имеется, то приходится вычислять, насколько сильно он распространен.

Сдавать биологический материал для такого анализа придется неоднократно, поскольку специалист должен отслеживать эффективность лечения. При его высокой результативности концентрация РНК-вируса в крови неизменно снижается.

При гепатите С количественный показатель вычисляется в случае острой стадии хронической болезни. Врачи делают примерные прогнозы продолжительности жизни.

Иногда обнаружить вирус в крови не удается, потому что имеет место ложноотрицательный результат. Бывает и противоположный — ложноположительный. Количественное исследование должно проводиться несколько раз, чтобы наверняка выявить коварную болезнь.

Количественные показатели: норма и превышение

Показатели РНК вируса гепатита С при количественном исследовании в норме демонстрируют полное отсутствие вируса. Если же врач замечает хотя бы минимальное его содержание в крови, речь идет о заражении. Варианты:

  1. В норме полимеразная цепная реакция не должна превышать 400 МЕ/мл. Такой показатель означает, что концентрация вируса очень мала и человек вряд ли может заразить окружающих. Однако болезнь есть, поэтому необходимо проводить срочную терапию.
  2. Если этот показатель выше 800 МЕ/мл, то речь идет о прогрессе болезни, хронической стадии ее развития. В таких случаях необходимо проводить максимально интенсивную лекарственную терапию, а иначе болезнь способна довести человека до летального исхода.
  3. Если этот показатель превышает 1 млн/мл, то речь идет о критическом развитии гепатита С. Вероятность летального исхода в ближайший месяц составляет 80%.

Количественный анализ на гепатит С расшифровку имеет разную, все зависит от стадии заболевания, пола и возраста пациента. Например, у мужчин концентрация вируса может быть выше 400 МЕ/мл, но болезнь будет все еще пребывать на ранних стадиях развития.

Врачи предпочитают проводить такие исследование на 1, 4, 23 и 12 неделях лечения. Это необходимо для того, чтобы проследить эффективность применяемых методик. Например, если на первой неделе показатель был 800 МЕ/мл, а к 12-й он стал 300 МЕ/мл, значит, лечение оказалось эффективным и заболевание начало отступать.

Врачи отмечают, что в 25% случаев удается если не победить болезнь, то хотя бы отсрочить следующий рецидив.

Помимо методики ПЦР-исследования крови, которая считается довольно дорогостоящей, используются и иные:

  • Применяется метод Р-ДНК, который стоит недорого, но имеет низкую чувствительность. Тут наличие вируса определяется лишь при его концентрации выше 500 МЕ/мл.
  • Популярен и метод транскрипционной амплификации (ТМА), главное достоинство которого кроется в высокой чувствительности при минимальной стоимости. Благодаря такому методу определить вирус удается даже при концентрации от 5–10 МЕ/мл.

«Гепатит С» — серьезный диагноз, часто означающий, что пациент умрет в ближайшие 5–10 лет. Однако методика ПЦР-исследования крови помогает определить болезнь на самых ранних стадиях и с помощью медикаментозной терапии остановить ее развитие.

www.vrednye.ru

Количественный анализ вируса гепатита с: расшифровка

Вирус гепатита С — это вирус, который содержит молекулу РНК. Он способен избегать иммунного ответа организма благодаря высоким способностям к мутации. Различают шесть основных генотипов вируса и множество субтипов. В нашем регионе в основном распространены 1, 2 и 3 генотипы.

У 75–80 % болезнь переходит в хроническую форму, что вызывает фиброз печени — состояние, при котором ткани печени заменяются соединительной тканью. Фиброз, в свою очередь, приводит к раку или циррозу. Основной путь передачи заболевания — через кровь. Если у человека имеются показания к проведению теста на гепатит С, ему проводят два основных теста. Определяют антитела к вирусу, и при их отсутствии считается, что гепатита у него нет. Если же в крови обнаруживается наличие антител к вирусу гепатита, проводится анализ методом ПЦР.

РНК таким методом определяется в крови уже через 10–12 дней после инфицирования и свидетельствует о том, что вирус активно размножается в организме. В этот период обнаружить вирус другим способом просто невозможно, так как специфических антител он еще не вырабатывает и поражения печени еще незаметны при биохимических анализах и биопсии.

пцр диагностика

Разновидности исследований методом ПЦР

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:

  1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
  2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
  3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса. Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется:

  • для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»;
  • для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни;
  • для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения.

Исследование проводится при наличии таких показаний:

  • гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела;
  • при микст-гепатитах;
  • если планируется проведение противовирусной терапии;
  • во время и после лечения от гепатита С;
  • при наличии хронического и острого гепатита С.

Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах. Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку.

Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови.

ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования.

Результаты количественного анализа определение РНК вируса, представленные лабораторией, расшифровываются следующим образом:

Числовое значение количества вируса, МЕ/млРасшифровка результатов
Не обнаруженоНорма для здоровых людей. Значение вируса ниже предела чувствительности метода или он отсутствует вовсе.
До 1.8*10^2Концентрация ниже линейного диапазона.
До 8*10^5 Вирус в крови обнаружен. Вирусная нагрузка низкая.
Больше 8*10^5 Вирус обнаружен. Вирусная нагрузка высокая.
Больше 2,4*10^7Вирус обнаружен. Виремия высокая, выше линейного диапазона.

Результаты количественного анализа могут подаваться как в единицах МЕ/мл, так и в копиях на мл. При этом коэффициент перевода обычно отличается для разных лабораторий и методик. Его значения колеблются в пределах от одного до пяти, принято считать, что в среднем 1 МЕ — это 4 копии на мл.

Метод Коэффициент пересчета, копий на мл в 1 МЕ
Amplicor HCV Monitor v.2.0 (руч.)0.9
HCV Monitor v2.0 (полуавт.)2.7
Versant HCV RNA 3.05.2
LCx HCV RNA3.8
SuperQuant3.4

Применимость исследования виремии на различных этапах

Анализ применяется для обнаружения активной инфекции в организме. По его результату можно судить о том, какова вероятность передачи вируса. Это важно, например, при беременности, когда речь идет о возможности заражения ребенка от матери больной гепатитом.

Анализ проводится только после обнаружения наличия в крови антител к вирусу. Он необходим, поскольку до 25 % людей, перенесших острую форму гепатита, выздоравливают сами по себе, и у них не обнаруживается вирус при лабораторных исследованиях. Результаты используются для оценки эффективности проведения лечения и до него.

ПЦР диагностика проводится до лечения, чтобы в последующем определить его эффективность. Вероятность благоприятного исхода лечения обратно пропорциональна этому параметру. Чем он выше — тем хуже прогноз.

Во время лечения анализ проводится на 1, 4, 12, 24 неделях. Лечение дает полный вирологический ответ при условии, что вирусная нагрузка таким анализом не определяется.

Если через 12 недель после начала терапии показатель не снижается на две логарифмические единицы,то вероятнее всего эта терапия не поможет в этом конкретном случае.

В анализах падение вирусной нагрузки на логарифмическую единицу выражается в уменьшении количества нулей результата на один. Например, с 1 000 000 МЕ она должна уменьшится до 100 000 МЕ.

После лечения определяется для обнаружения рецидивов. Так, отклонение этого параметра от нормы говорит о том, что количество вируса в организме растет и, таким образом, болезнь возвращается.

Некоторые показатели, могут оказывать влияние на результат. Прежде всего, это возможная ошибка лаборатории, нарушения норм проведения исследования, норм содержания и подготовки образцов, а также:

  • загрязнение образца биоматериала;
  • наличие в крови остаточных следов гепарина;
  • присутствие в крови ингибиторов — субстанций, которые представляют собой химические соединения или белки, которые оказывают влияние на компоненты ПЦР.

Отличаться результаты исследования могут также для разных лабораторий, что обусловливается применением разных реактивов и других причин. Такое явление абсолютно нормально. Поэтому для правильной оценки эффективности лечения стоит проводить анализ в одной и той же лаборатории.

Важные замечания по поводу методики исследования:

  • По уровню вирусной нагрузки нельзя судить о степени поражения печени или тяжести протекания самого гепатита. Для оценки этих показателей, необходимо проводить дополнительные исследования, такие как биохимический анализ крови, биопсия, эластометрия и другие.
  • При планировании и противовирусной терапии, кроме показателя виремии, важно определить генотип вируса.

apechen.ru

Вирус гепатита с рнк 3. Вирусные гепатиты. LuchshijLekar.ru

Об авторе сайта

Степанова Татьяна Владимировна – врач - гепатолог, гастроэнтеролог, пульмонолог, терапевт высшей квалификационной категории, действующий член EASL (Европейской ассоциации по изучению печени), имеет международный сертификат исследователя стандарта GCP (Good clinical practice), подполковник медицинской службы.

1996 году окончила Военно-медицинский факультет при Саратовском государственном медицинском университете. Была направлена в Южно-Сахалинск на должность старшего ординатора Гарнизонного госпиталя, где в течение 7 лет занималась лечением больных с тяжелой терапевтической патологией: воспаление легких, бронхиальная астма, инфаркт миокарда, гипертоническая болезнь, язвенная болезнь, гепатиты и циррозы печени.

В 2001 году прошла профессиональную переподготовку по пульмонологии, в 2003 году – по гастроэнтерологии, гепатологии.

С 2003 по 2006 год проходила учебу в клинической ординатуре при Государственном Институте Усовершенствования врачей МО РФ.

С 2003 года основной сферой практической деятельности является гастроэнтерология, гепатология.

С 2003 года принимает участие в проведении клинических испытаний новых лекарственных препаратов для лечения пациентов с вирусными гепатотропными инфекциями по международным правилам GCP. Всего провела 15 клинических исследований. В настоящее время возглавляет клиническое исследование по оценке безопасности и эффективности нового препарата для лечения вирусного гепатита В. В 2009 году комиссия FDA высоко оценила работу исследовательского центра, где основным исследователем является Степанова Татьяна Владимировна.

С 2003 года занимается лечением больных вирусными гепатитами, накопила огромный опыт лечения больных противовирусными препаратами. В совершенстве знает проблему лечения больных вирусными гепатитами с сопутствующими заболеваниями: сахарный диабет, гипертоническая болезнь, заболевания почек, бронхиальная астма, псориаз, артриты, ВИЧ, наркомания, алкоголизм. Проводит противовирусное лечение больным с компенсированным и декомпенсированным циррозом печени. Занимается лечением беременных с патологией печени.

Благодаря глубокому знанию терапии и умелому сочетанию лекарственных препаратов выработала свои схемы лечения больных, которые позволили добиться выздоровления практически 90% обратившихся больных с вирусными гепатитами. В своей лечебной деятельности использует принципы доказательной медицины. Умело контролирует побочные эффекты противовирусных препаратов: снижение тромбоцитов, лейкоцитов, депрессивные и другие состояния, благодаря чему практически никто преждевременно не прекращает противовирусное лечение.

В совершенстве владеет методикой проведения пункционной биопсии печени. Провела более 300 биопсий.

С 2004 года постоянно работает в качестве консультанта на ведущих гепатологических сайтах. Ответила более чем на 20 000 вопросов, посвященных заболеванием печени. Часто оказывает профессиональную помощь в лечении гепатологических больных коллегам из различных регионов нашей страны, ближнего и дальнего зарубежья.

Татьяну Владимировну часто приглашают на популярные медицинские телевизионные передачи в качестве врача – эксперта.

Ответственность, компетентность, высокий профессионализм характеризуют ее во врачебной деятельности.

О личных качествах можно судить по одному характерному факту: ее пациенты никогда не уходят к другому доктору.

Статья о враче Степановой Татьяне Владимировне размещена в энциклопедии Лучшие люди России разделе “Медицина и здравоохранение”.

База знаний: HCV, генотипирование, РНК [реал-тайм ПЦР]

Молекулярно-генетическое исследование для определения генотипа вируса гепатита С.

Применяемый набор реагентов может быть использован для диагностики вируса гепатита С и наиболее распространенных на территории России генотипов HCV (1a, 1b, 2 и 3a/3b) in vitro.

Вирус гепатита С (ВГС).

Hepatitis C Virus (HCV) Genotyping, HCV Subtype.

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (ВГС) способен поражать клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты). В основном инфекция передается через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты), реже вероятно заражение половым путем.

Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и в большинстве случаев остается невыявленным. У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, которая увеличивает риск развития цирроза, печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы. За свое скрытое, но разрушительное действие инфекция получила неофициальное название «ласковый убийца».

ВГС обладает наибольшей вариабельностью среди всех возбудителей вирусных гепатитов и благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Геномы вируса значительно отличаются в разных странах мира и имеют различную чувствительность к препаратам интерферонов.

Существует 6 основных генотипов вируса гепатита С и около 500 субтипов. Наиболее распространен в мире генотип 1 (40-80 %). 1а тип часто выявляется в США, 1b характерен для Западной Европы и Южной Азии. Генотип 2 встречается с частотой 10-40 %. Генотип 3 распространен в Шотландии, Австралии, Индии и Пакистане. ВГС 4 типа характерен для Средней Азии и Северной Африки, генотип 5 – для Южной Африки, 6 – для некоторых стран Азии. В России преобладает генотип 1b, далее с убывающей частотой - 3, 1a, 2, в США – 1a/1b, 2b, и 3a.

Противовирусная терапия, направленная на подавление прогрессирования заболевания, в редких случаях может ускорить развитие осложнений со стороны печени. Это происходит при неправильной оценке клинических и лабораторных показателей. Генотипирование РНК вируса гепатита С позволяет спрогнозировать эффект от планируемой терапии.

Генотип 1 хуже поддается лечению, чем генотипы 2 и 3. Кроме того, биопсию печени важнее провести именно при генотипе 1. Повышенные дозы препаратов интерферона рекомендованы для пациентов с 1-м и 4-м генотипами. Курс терапии у таких пациентов должен быть продлен до 48 недель даже при отсутствии вируса в крови более 24 недель. В случае успешности лечения, которая подтверждается снижением вирусной нагрузки крови (

Генотипирование вируса гепатита С (HCV) (определение РНК) (генотипы 1а, 1в, 2, 3а/3б)

Вирус гепатита С (ВГС ) представляет собой небольшой (55-65 нм в размере) сферический РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae. Он является причиной развития гепатита С.ВГС состоит из основного генетического материала (РНК), окруженной защитной белковой оболочкой, а также липидной (жировой) оболочкой сотовой структуры, которая содержит два оболочечных белка — гликопротеины E1, E2, встроенные в липидные оболочки. Белки E1 и E2 обеспечивают проникновение вируса в клетку и закрепление в ней.Геном HCV включает в себя одноцепочную РНК, имеющую 9600 нуклеотидных оснований.Гепатит C имеет условную классификацию по структуре РНК и делят на генотипы и субтипы. Выделяет шесть генотипов по одному признаку и одиннадцать – по другому. По сути, генотип – это комплекс вирусов, которые в медицинской практике получили название квазивиды . Они стремительно прогрессируют и развиваются, изменяются с невероятной скоростью, при этом абсолютно не восприимчивы к лекарственным средствам. Именно процессом генотипирование и объясняются сложности в разработке вакцины, которой на сегодняшний день попросту не существует в природе.Наиболее распространен в мире генотип 1 (40-80 %). В Европе и России частота определения генотипов располагается в следующем порядке: 1b, 3ав, 2.Геномы вируса значительно отличаются в разных странах мира и имеют различную чувствительность к препаратам интерферонов.При хроническом гепатите С, ранее считавшемся неизлечимым, современная противовирусная терапия позволяет добиться удаления вируса из клеток печени, предотвратить тем самым развитие тяжелых осложнений – цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы.Генотипирование РНК вируса гепатита С позволяет правильно назначить лечение и его продолжительность, спрогнозировать эффект от планируемой терапии.Генотип 1 хуже поддается лечению, чем генотипы 2 и 3. У пациентов с генотипом 1в хронизация HCV –инфекции происходит в 90% случаев, в то время как у носителей генотипов 2а и 3а – только в 35-50%. Повышенные дозы препаратов интерферона рекомендованы для пациентов с 1-м и 4-м генотипами. Курс терапии у таких пациентов должен быть продлен до 48 недель даже при отсутствии вируса в крови более 24 недель. Если количество вирусных копий не снизилось на 2 порядка за 12 недель, значит, лечение неэффективно и его необходимо пересмотреть.Генотипы 2 и 3 хорошо поддаются терапии в 80 % случаев, обычно это занимает 24 недели.Лечение разрабатывается с учетом пола и возраста пациента, присутствующих у него симптомов, ранее проводимой терапии, структуры и функции печени, а также лабораторных показателей.К сожалению, есть вероятность повторного заражения вирусным гепатитом С другого генотипа из-за отсутствия перекрестного иммунного ответа и стойкого иммунитета.

Показания к исследованию:

  • Определить необходимость лечения и спрогнозировать течение заболевания.
  • Планирования длительности противовирусной терапии и дозировки лекарств.
  • Прогнозирование эффективности лечения.
  • Принятие решения о биопсии печени.

Когда назначается исследование?

  • При обнаружении РНК вируса гепатита С и планировании противовирусной терапии.

Что может влиять на результат?Генотип вируса гепатита С иногда не выявляется при вирусной нагрузке крови менее 200 копий /млЧто значит, если в результатах генотипирования стоит генотип не типируется ?Это может быть по двум причинам — у Вас не типичный для нашего региона, экзотический генотип HCV или низкая концентрация вирусной РНК в крови. В первом случае, нужно переделать анализ в другой лаборатории, которая типирует генотип 4. Если результат будет прежним, то лечение проводят по схемам, эффективным в отношении генотипов 1, 2, и 3. Во втором случае нужно пересдать тест в диагностическом центре с более чувствительным оборудованием.

Срок исполнения - 3 рабочих дня.

Исследуемый материал - кровь.

Источники: http://www.gepamed.ru/?PAGEN_1=19, http://www.helix.ru/kb/item/342, http://gemohelp.ru/id/267

Комментариев пока нет!

luchshijlekar.ru


Смотрите также